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一、樣品前處理

1、所用試劑

1.1 Loading Buffer：鈉鹽系統(tǒng)，pH 2.2

1.2 濃鹽酸，濃度≥36%,優(yōu)級純

1.3 6mol/L 鹽酸：取500mL 鹽酸加水稀釋至1000mL,混勻

1.4 水：去離子水

1.5 20種氨基酸標準品

2、前處理設(shè)備

1）分析天平:精度為 0.0001g

2）移液槍及槍頭

3）一次性注射器及0.22μm濾膜

4）低范圍pH試紙

5）真空干燥烘箱

6）無油真空泵

7）電熱平板及稱量瓶

3、樣品制備（由客戶提供的內(nèi)部測試提取方法）

準確稱取試樣10.0g，加入0.1mol/L鹽酸溶液500mL，攪拌3h，用飽和氫氧化鋰溶液調(diào)節(jié)pH至2.2,用純水轉(zhuǎn)移定容至1000mL容量瓶中搖勻。取出適量后,離心機4000r/min離心20min。取中下層溶液過0.45μm濾膜，并取濾液1mL置于10mL容量瓶中，加入Loading Buffer稀釋定容至刻度，搖勻，等待上機測試。

一、分析方法描述（Biochrom 30+）

氨基酸分析儀分析方法參數(shù)：

1）色譜柱：Biochrom Na型陽離子交換樹脂柱，4.6x20cm

2）分離程序：

運行時間：經(jīng)分析時間+再生時間171.45min

3）反應單元溫度：135℃

4）檢測波長：570nm、440nm同時檢測

三、樣品中氨基酸含量的計算

樣品測定液氨基酸的含量按式(1)計算:

Ci = Cs/As × Ai × F…………………(1)式中:

Ci ——樣品測定液氨基酸i的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);

Cs ——氨基酸標準工作液氨基酸s的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);

Ai ——試樣測定液氨基酸i的峰面積;

As ——氨基酸標準工作液氨基酸s的峰面積;

F ——樣品稀釋倍數(shù)。

附：腸內(nèi)營養(yǎng)粉劑樣品中的氨基酸種類及其分析圖譜、做樣結(jié)果：

1. AA-PA